1.丙酮酸→磷酸烯醇式丙酮酸：丙酮酸在线粒体内，由丙酮酸羧化酶催化生成草酰乙酸，后者转变为苹果酸穿出线粒体并恢复为草酰乙酸，再在磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的催化下转变为磷酸烯醇式丙酮酸。

2.1，6-双磷酸果糖在果糖二磷酸酶催化下转变为6-磷酸果糖。

3.6-磷酸葡萄糖水解为葡萄糖，此反应由葡萄糖-6-磷酸酶催化。该酶是糖异生的关键酶之一，不存在于肌肉组织中，故肌肉组织不能生成自由葡萄糖。