抑制剂与酶的结合是可逆的，所以酶促反应抑制程度取决于底物、抑制剂与酶的亲和力及二者浓度的相对比例。当底物浓度[S]足够高时，相对而言，竞争性抑制剂对酶的竞争性作用可忽略不计，此时几乎所有的酶分子均可与底物相作用，故仍可达到Vmax。然而，由于竞争性抑制剂的干扰，为达到无抑制剂存在时的反应速度，其所需的[S]将会升高；即在竞争性抑制剂存在时，酶与底物的亲和力下降，即Km值变大。