酶活性测定样品的贮存与处理是医学检验技师考试需要了解的知识点,医学教育网小编搜集整理了相关内容,希望对广大复习备考的考生有所帮助。
如果在测定活性之前所贮的样品酶活性有了降低,无论所用的仪器如何先进,也不能获得准确的结果。在适当的条件下酶会失活,因而必须强调在收集样品之后应尽可能快速测试酶活性,最好当天进行测定。关于酶样品的贮存与处理应注意以下几点:
1.酶活力测定最常用的样品是血清或血浆。制备血浆所用的抗凝剂可抑制某些酶的活性,如EDTA能抑制ALP,草酸盐抑制LDH,肝素对CK及某些其他酶有轻微的抑制作用,故一般样品以血清为佳。
2.多数血清酶以较高浓度存在于红细胞、白细胞或血小板中。因此分离血清时应注意避免溶血。
3.光照对CK活性有抑制作用,因此,主张CK测定的血清应贮存于4℃的暗处,测定时应该注意避光。
4.由于血清白蛋白对酶蛋白有稳定作用,在它的存在下,某些酶在室温下可保存1~2天而无明显失活。
5.有些酶由于自身的特性,在贮存时需特别加以注意。例如LDH同工酶在冰箱保存不稳定,在室温反而稳定时间较长,所以测定LDH活力的血清样品,应置于室温下,2~3天内可保持稳定,不能存放冰箱过夜。
6.由于酶很容易发生表面变性,因此在操作时应避免形成泡沫。
7.巯基对于大多数酶来说是十分重要的,可能起如下几方面的作用:①参与催化;②和底物结合;③组成变构部位;④维持酶的三级或四级结构。因此,使巯基保持天然状态是使许多酶稳定化的最重要的条件之一,基于这个理由,在酶的活性测定、抽提、制备以及保存过程中,常可添加-SH保护剂,如半胱氨酸、谷胱甘肽、2-巯基乙醇、二硫苏糖醇、二硫赤藓糖醇等。