血液中除硫化血红蛋白（SHb）外的各种Hb（如氧合血红蛋白、碳氧血红蛋白、高铁血红蛋白（Hi）或其他衍生物）均可被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白，再和CN-结合生成稳定的棕红色复合物一氰化高铁血红蛋白，其在540nm处有一吸收峰，用分光光度计测定该处的吸光度，经换算即可得到每升血液中的血红蛋白浓度，或通过制备的标准曲线查得血红蛋白浓度。